Browsing by Author "BOUKERCHE Maghnia"

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    Isolement et caractérisation de bactéries productrices de protéase
    (2020) BOUKERCHE Maghnia; MOSTARI Radjâa; Encadreur : KANOUN Khedoudja
    Résumé : ( Français ) La demande industrielle des préparations actives des enzymes protéolytiques, produites par des microorganismes appropriées, aux pH et aux températures extrêmes stimule à continuer la recherche de nouvelles souches productrices de protéase à intérêt biotechnologique. Ces enzymes constituent un rôle important dans divers utilisations commerciales, telle que l’industrie pharmaceutiques et les traitements des eaux usées industrielles. La présente étude devrait porter sur l’isolement et la caractérisation des bactéries protéolytiques. Dans cette optique des échantillons devraient être prélevés à partir de sols riches en protéines et de source thermale, au niveau de la région de Sidi-Bel-Abbès et d’Ain Temouchent en Algérie. La première partie devrait consiste à purifier les souches bactériennes ayant une activité protéolytique par un screening primaire. Après isolement et purification des isolats sur gélose nutritive additionnée au lait écrémé, on devrait passer à la sélection des souches les plus performantes, par mesure de la zone d’hydrolyse, sur un milieu spécifique à la production de l’enzyme protéase. L’identification phénotypique des souches sélectionnées est devrait basée sur plusieurs critères, qui sont définies par différentes techniques : l’étude macroscopique et microscopique des isolats, la détermination du type respiratoire, la mobilité, la formation des spores ainsi que l’étude des caractères biochimiques tel que la recherche de catalase et d’oxydase, ainsi que l’utilisation de la galerie API20E pour définir le genre des isolats. La production de l’enzyme est estimée par le dosage de l’activité protéolytique, sur le milieu de production liquide. L’activé enzymatique devrait mesurée a l’aide d’un spectrophotomètre, qui nous permet aussi d’étudier les propriétés de l’enzyme protéase tel que le pH, la température et la durée d’incubation optimale, pour une production enzymatique maximale. L’étude rétrospective que nous avons faite s’avère que, la plupart des bactéries productrices de protéase sont des bactéries à Gram positif comme Bacillus sp. Mots clés : protéase, caractérisation, bactéries protéolytique, identification, activité protéolytique. Abstract : ( Anglais ) The industrial demand for active preparations of proteolytic enzymes, produced by appropriate microorganisms, at pH and temperature extremes, stimulates further research into new protease-producing strains of biotechnological interest. These enzymes play an important role in various commercial industry and industrial wastewater treatment. The present study focused on the isolation and characterization of proteolytic bacteria. With this in mind, samples were taken from soils rich in proteins and from a thermal spring, in the region of Sidi-Bel-Abbes and Ain temouchent in Algeria. The first part consists in purifying the bacterial strains having a proteolytic activity by a primary screening. After isolation and purification of the isolates on nutrient agar added to skimmed milk, the selection of the best performing strains is carried out, by measuring the hydrolysis zone, on a medium specific to the production of the protease enzyme. The phenotypic identification of the selected strains is based on several criteria, which are defined by different techniques: the macroscopic and microscopic study of the isolates, the determination of the respiratory type, the mobility, the formation of the spores as well as the study of the biochemical characters such as the search for catalase and oxidase, as well as the use of the API20E gallery to define the genus of isolates. The production of the enzyme is estimated by assaying the proteolytic activity on the liquid production medium. The enzymatic activity is measured using a spectrophotometer, which also allows us to study the properties of the protease enzyme such as pH, temperature and optimal incubation time, for maximum enzyme production. The retrospective study that we made turns out that most of the bacteria producing protease are bacteria with Gram positive such as Bacillus sp. Keywords: protease, characterization, proteolytic bacteria, identification, proteolytic activity .