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Effet de synergie des bactériocines issues des bactéries lactiques et pseudolactiques et des huiles essentielles d’Inula viscosa contre les germes pathogènes.
(2016-05-25) MEKRI Meriem; Encadreur: ABBOUNI Bouziane; Co-Encadreur: DOUMANDJI Amel
Résumé (Français et/ou Anglais) : Dans ce présent travail, l’effet de synergie des bactériocines produites par des bactéries lactiques isolées du lait de chèvre Algérien et les huiles essentielles d’Inula viscosa a été mis en évidence. Les trois bactéries lactiques isolées appartiennent aux espèces suivantes : Streptococcus thermophilus (BL16), Pediococcus acidilactici (BL20) et Enterococcus faecium (BL50). L’étude de l’activité antagoniste des trois bactéries lactiques sélectionnées antagonistes vis-à-vis de B. cereus , St. aureus ATCC 25932, E. coli et Ps. aeruginosa ATCC 27853 a montré que B. cereus et St. aureus ATCC 25932 se manifestent sensibles aux bactériocines des bactéries lactiques. Cependant, E.coli et Ps. aeruginosa ATCC 27853 ont manifesté une résistance contre les bactéries lactiques antagonistes. La caractérisation physico-chimique des substances responsables des activités antagonistes des trois souches a montré la présence d’une substance de nature protéique, caractérisée par sa thermorésistance et une valeur de pH optimale comprise entre 4-7, ce qui suggère que cette substance inhibitrice est de type « Bactériocine ». L’étude du suivi de la cinétique de croissance bactérienne et le mode d’action des bactériocines a montré la présence d’une corrélation entre la production de la biomasse bactérienne et la sécrétion de bactériocine dans le surnageant du milieu de culture MRS liquide. Les bactériocines produites par de Streptococcus thermophilus (BL16), Pediococcus acidilacticci (BL20) et Enterococcus faecium (BL50) ont manifesté un effet bactériostatique et bactéricide sur St. aureus ATCC 25932 respectivement. L’extraction des huiles essentielles d’Inula viscosa réalisée par hydrodistillation a donné un rendement de 0.2 %. Les résultats de l’analyse par CG/SM de l’huile essentielle ont permis la caractérisation des principaux composés. Les (CMI) et (CMB) sont comprises entre 0.3-1.25 mg.ml-1 et 0.6-5 mg.ml-1 respectivement. L’étude de la dynamique d’action des huiles essentielles d’Inula viscosa a montré que l’effet bactéricide des huiles essentielles dépend du temps. L’effet de synergie entre les bactériocines des bactéries sélectionnées (BL16, BL20, et BL50) et les huiles essentielles d’Inula viscosa étudié selon le test en damier, a affiché une synergie (FICI <0.5) pour St. aureus ATCC 25932, B. cereus et Ps. aerugenosa ATCC 27853. En conclusion, la combinaison des bactériocines et les huiles essentielles d’Inula viscosa pourrait être considérée comme une alternative prometteuse dans l’industrie alimentaire capable d’empêcher la prolifération des bactéries à Gram (-) responsable d’altération des aliments.
Isolement et caractérisation des bactéries promotrices de développement (PGPB) associées au pois chiche (Cicer arietinum L.)
(2016-05-25) GHALEM Mimouna; Encadreur: ABBOUNI Bouziane; Co-Encadreur: LABDI Mohamed
Résumé (Français et/ou Anglais) : L’objectif de ce travail est l’étude de l’effet des sols et des variétés sur le développement du pois chiche, l’enrichissement du sol avec de la microflore rhizosphérique bénéfique et l’isolement de bactéries PGPR diazotrophes. A cet effet, deux variétés de pois chiche ont été cultivées sur six sols provenant de l’Ouest du pays. Les résultats ont montré que le sol d’Ain Tolba est le plus favorable à la culture du pois chiche. Des deux variétés testées, la variété Flip 93.93C a présenté les niveaux de développement les plus stables. Le sol de Ain Tolba est utilisé pour l’isolement des rhizobactéries associées au pois chiche. L’isolement effectué a permis l’obtention de 12 isolats bactériens diazotrophes. Un screening des isolats est effectué en s’appuyant sur l’étude de leur capacité de production de HCN, la solubilisation du phosphore, la production d’AIA, l’hydrolyse des protéines, de la chitine et de la cellulose et leur activité antifongique vis-à-vis de Fusarium oxysporum.f. sp. Ciceris. La totalité des isolats a manifesté une excellente activité antagoniste vis-à-vis de Fusarium oxysporum. Par ailleurs, les isolats NfA, NfD et NfC, ont montré une bonne capacité à la solubilisation du phosphore, une activité antagoniste modérée et une bonne activité protéolytique, cellulolytique et chitinolytique. A l’exception de la souche Nf5, la majorité des isolats se manifeste capable de produire l’acide indole acétique à partir du L-tryptophane. Le pouvoir PGP des isolats mis en évidence in vivo sur des graines de pois chiche, a montré l’excellente capacité des isolats Nf5, NfA, NfD et NfC à la promotion de la germination des graines et de la croissance des plantules issus. L’identification phénotypique de ses isolats a montré l’appartenance des isolats au genre Azotobacter. Enfin, afin d’évaluer l’effet de la souche NfA sur le développement et la résistance des graines du pois chiche au phytopathogène Fusarium oxysporum f. sp. Ciceris, un essai d’inoculation comportant quatre traitements est effectué en utilisant la variété Flip 93.93C. Après 4 semaines de culture, la souche NfA a pu démontrer un effet phyto-stimulateur et phytoprotecteur en inhibant l’effet du phytopathogène sur la germination et le développement des plantes inoculées.
Isolement et identification des bactéries antagonistes vis-à-vis des souches pathogènes multirésistantes
(2021-05-04) DJELLOUL DAOUADJI Soumia; Encadreur: ABBOUNI Bouziane
Résumé (en Français) : L’émergence sans cesse croissante de bactéries résistantes face à l’appauvrissement des ressources thérapeutiques et à l’absence d’avancée dans le domaine des antibiotiques, mettent en avant l’importance de trouver de nouvelles solutions. Les bactéries lactiques sont depuis des millénaires un moyen de bio conservation efficace de nombreux produits alimentaires. Les 200 bactéries lactiques isolées à partir du lait (chamelle et chèvre) et des produits laitiers fermentés traditionnels (Jben et kamaria) du sud Algérienː Enterococcus, Streptococcus, Lactococcus et Leuconostoc sont identifiées phénotypiquement. La mise en évidence de l’activité antibactérienne vis-à-vis de souches pathogènes multirésistantes, isolées à partir de patients atteints d’infections au service de réanimation est évaluée et les souches résistantes aux antibiotiques sont retenues. Ensuite, les souches lactiques isolées, selectionnées antagonistes Lactococcus raffinolactis LAB9 et Leuconostoc mesenteroides subsp.cremoris LAB13 sont utilisées pour une éventuelle caractérisation de bactériocines. La caractérisation physico-chimique de bactériocines produites chez les souches isolées, sélectionnées antagonistes (LAB9 et LAB13) a révélé leur thermo-résistance, accompagnée d’une activité inhibitrice stable à différentes valeurs de pH. Ensuite, une purification partielle de bactériocine par précipitation avec le sulfate d’ammonium est réalisée et la concentration minimale inhibitrice est déterminée. L'activité antibiofilm souches LAB9 et LAB13 vis-à-vis de la formation de biofilms de Staphylococcus aureus et Pseudomonas aeruginosa est est effectuée. L'étude du suivi de la cinétique de croissance a montré une inhibition considérable de la croissance P. aeruginosa (PA), après l'ajout d'un volume de 1 ml des surnageants des bactéries lactiques isolées, sélectionnnées (LAB9 et LAB13). Cette inhibition est expliquée par l'arrêt du cycle cellulaire de P. aeruginosa PA (une croissance déséquilibrée), en comparaison avec la biomasse non traitée (croissance équilibrée). En conclusion, les résultats obtenus ont montré la nécessité d’approfondir les recherches sur la purification des bactériocines par l'utilisation des techniques modernes telles que HPLC, FPLC, électrophorèse et leur clonage dans des vecteurs d'expressions puissants. Les mots clés : Produits laitiers, bactéries lactiques, bactéries pathogènes , multirésistance, Bactériocine, CMI , CMB, Biofilm. Abstract (en Anglais) : The ever-increasing emergence of bacteria resistant to the depletion of therapeutic resources and the lack of progress in the field of antibiotics, highlights the importance of finding new solutions. Lactic acid bacteria have been an effective means of bio-preservation for many food products for thousands of years. The 200 lactic acid bacteria isolated from milk (camel and goat) and traditional fermented dairy products (Jben and kamaria) from southern Algeria Enterococcus, Streptococcus, Lactococcus and Leuconostoc are phenotypically identified. The demonstration of the antibacterial activity vis-à-vis multiresistant pathogenic strains isolated from patients with infections in the intensive care unit is evaluated and the antibiotic resistant strains are selected. Then, the isolated lactic strains, selected antagonists Lactococcus raffinolactis LAB9 and Leuconostoc mesenteroides subsp.cremoris LAB13 are used for a possible characterization of bacteriocins. The physicochemical characterization of bacteriocins produced in isolated strains, selected antagonists (LAB9 and LAB13) revealed their thermo-resistance, accompanied with a stable inhibitory activity at different pH values. Then, partial purification of bacteriocin by precipitation with ammonium sulfate is carried out and the minimum inhibitory concentration is determined. The antibiofilm activity of the LAB9 and LAB13 strains against the formation of Staphylococcus aureus and Pseudomonas aeruginosa biofilms is carried out. The study of the monitoring of the growth kinetics showed a considerable inhibition of the growth of P. aeruginosa (PA), after the addition of a volume of 1 ml of the supernatants of the isolated, selected lactic bacteria (LAB9 and LAB13). This inhibition is explained by the cell cycle arrestof P. aeruginosa PA (unbalanced growth), in comparison with untreated biomass (balanced growth). In conclusion, the results obtained showed the need for further research on the purification of bacteriocins by the use of modern techniques such as HPLC, FPLC, electrophoresis and their cloning into powerful expression vectors. Keywords : Dairy products, lactic acid bacteria, pathogenic bacteria, multidrug resistance, Bacteriocin, CMI, CMB, Biofilm.
Isolement, Identification et production des Polyhydroxyalcanoates (PHAs) chez le genre Bacillus.
(2015-12-13) MEDJEBER Nacera; Encadreur: ABBOUNI Bouziane
Résumé (Français et/ou Anglais) : Résumé en Français Les impacts environnementaux néfastes causés par les déchets plastiques est une préoccupation mondiales. Les polyhydroxyalcanoates (PHAs) semblent être des candidats potentiels pour remplacer certains plastiques conventionnels. Dans la présente étude, des souches du genre Bacillus caractérisées par leurs capacités de synthétiser des lipidiques intracellulaires ont été isolées à partir de quatorze (14) échantillons de sol et d’eau usée. Dans l’ensemble quatre-vingt-deux (82) isolats sont criblées avec une coloration spécifique au Noir Soudan B, 17 souches sont révélées positives pour le PHA, identifiés comme étant Bacillus cereus (8 souches), B. megaterium (8 souches) et B. mycoides (1 souche). Dans le cadre de la valorisation des déchets agroalimentaires, et la réduction des coûts de production de bioplastique ; la mélasse de canne, la mélasse de betterave et le moût des rebuts de datte ont été testé comme source de carbone. Une production maximale de polyhydroxalcanoates (PHAs) a été observée chez la souche D9 après 48h d’incubation en présence de 2% de glucose puis 3% de Mélasse de betterave (50% et 41% par mg de MSC respectivement). Cependant le maximum de croissance (0,98g/l) était observé avec 5% de moût des rebuts de datte. Sur la base des propriétés morphologique et physiologique ainsi sur l’amplification du gène 16S rDNA, la souche D9 a été reconnue comme étant Bacillus megaterium. Après extraction des polymères au chloroforme, une analyse quantitative/qualitative par gravimétrie et spectrométrie Raman indique les groupements chimique des PHB. Résumé en Anglais The impact of plastic waste for environment emerge as a world wild problem and a global challenge, Polyhydroxyalkanoates (PHAs) present potential candidates to replace some conventional plastics. In this study, Bacillus strains able of synthesizing intracellular lipids were isolated from fourteen (14) samples of soil and waste water, identified and selected based on Sudan Black B stain. Overall, eighty-two (82) isolates were screened, 17 strains revealed positive for PHA, classified as Bacillus cereus (8 strains), B. megaterium (8 strains) and B. mycoides (1 strain). As part of the enhancement of agro-food waste and the reduction of bioplastic production costs; cane molasses, beet molasses and must date scrap were tested as a carbon source. Maximum production polyhydroxalcanoates (PHA) was observed with the D9 strain after 48 hours incubation in the presence of 2% glucose and 3% beet molasses (50% and 41% per mg DCM respectively). However, the maximum growth (0.98 g / l) was found with 5% must of dates scrap. Based on morphological properties, physiological characteristics and the amplification of the 16S rDNA gene, the D9 strain has been identified as Bacillus megaterium. After chloroform extraction, a quantitative / qualitative analysis by gravimetric and Raman spectroscopy indicates the chemical groups of PHB.
Production des biosurfactants par les microorganismes et leurs applications
(2016-04-20) CHERIF Nadjib; Encadreur: ABBOUNI Bouziane
Résumé (Français et/ou Anglais) : The majority of commercially available surfactants are made from petroleum and presents a major risk to the environment and by their toxicities and biodégradabilités. The biosurfactants are mainly produced by yeast, fungi, bacteria that grow under aerobic conditions in liquid culture media containing a carbon source such as carbohydrates, oils and hydrocarbons. The present work focused on bacteria that are distinguished by their ability to produce biosurfactants. These biomolecules have a preferred value in several areas including the sectors of environment, industry and medical sciences. Thirty-seven strains has been isolated from various sites in particular polluted lands by hydrocarbons (petrol, diesel, oil) and waste from olive oil mill. After preliminary screening, eight strains present a haemolytic activity on blood agar, reflecting their ability to produce biosurfactants. In the second screening performed by "Drop Collapsing", "Oil Displacement" tests, measurement of emulsification index and surface tension, three strains showed a high production potential of these biomolecules. Following the results of macroscopic, microscopic and biochemical identification, these strains affiliated to the species Pseudomonas aeruginosa, Bacillus subtilis, and Bacillus cereus. The study of the parameters influencing the production of biosurfactants was carried out by fermentation on a mineral salt medium. High rhamnolipids production was observed during the exponential phase with the strain P. aeruginosa NF5 using olive oil (30 g/l) and yeast extract (5 g/l) as carbon and nitrogen sources, and pH 7 with shaking at 150 rpm and a temperature of 30 ° C. Thus, a reduction in surface tension to 3.7 mN/m of the culture medium was observed with B. subtilis ZS1 when using glucose (10 g/l) and ammonium sulfate (0.1 g/l) as carbon and nitrogen sources.