- [ VRPG-Doc] Sciences biologiques --- علوم بيولوجية

Permanent URI for this collection

https://dspace.univ-sba.dz/handle/123456789/459

Browse

Browsing - [ VRPG-Doc] Sciences biologiques --- علوم بيولوجية by Author "Encadreur: ABBOUNI BOUZIANE"

Now showing 1 - 1 of 1
  • Thumbnail Image
    Item
    Isolement et caractérisation des bactéries productrices de protéases à intérêt biotechnologique
    (2018-02-19) BOUKHTACHE HADJER; Encadreur: ABBOUNI BOUZIANE
    Résumé (Français et/ou Anglais) : RESUME Les producteurs d’enzymes ont effectué des recherches afin de trouver des alternatifs moins dispendieux en utilisant les sols riches en protéines comme substrat prometteur économique, afin de stimuler la production à des coûts moindres et valoriser les sous produit issu du sol. Dix (10) échantillons de sols riches en protéines où les déchets sont soumis à une fermentation naturelle, prélevés dans les environs de la ville de Chlef, en Algérie à partir des sols entourant, les laiteries, les abattoirs, les usines des alimentations de bétails et les sols riches en matières organiques en décomposition, ont fait l’objet d’une analyse microbiologique à fin de déterminer la diversité des bactéries productrices de la protéase. Le screening primaire a permis l’isolement de 115 souches protéolytiques, parmi lesquelles, 15 sont sélectionnées dans le screening secondaire comme les plus performantes et sont retenues pour être identifiées dans un premier temps par une caractérisation phénotypique, suivie d’une caractérisation génotypique par la technique de la PCR et le séquençage du gène codant l’ADNr 16S. L’utilisation de l’outil de la biologie moléculaire a permis une identification génétique des souches sélectionnées productrices de la protéase et l’analyse phylogénétique. Dans le but d’augmenter la production de la protéase chez les souches isolées sélectionnées, un certain nombre de paramètres tels que la source de carbone et d’azote, la température, le pH, le temps de réaction et la concentration en inoculum sont optimisés. Les résultats obtenus ont montré que chez les souches (T₂, T₂op, TB₂op, T₂', AH₂(-2), Xg₄, P₂op, E₃S₃P, H₁(-6), NB₁op,Y₄, LV₂, E₃S₄p, E₃S₁IBN et P₁op) une production maximale est obtenue après 48heures d’incubation lors de leurs inoculation sur un milieu de culture de production contenant : 1g/l glucose, 1g/l amidon, 1g/l caséine, 1% peptone et 2% d’inoculum avec des taux de production de (1,60, 1,45, 1,50, 1,80, 1,65, 1,30, 1,30, 1,70, 1,50, 1,65, 1,62, 0,95, 1,55, 1,48et 0,60 UI /ml) respectivement. L’activité protéolytique est mesurée et l’analyse de la pureté est ensuite effectuée par SDS-PAGE en conditions dénaturantes révélant l’apparence de bandes protéiques de poids moléculaires différents suggérant que ces enzymes sont homogènes, ce qui confirme que les souches isolées ont des activités protéolytiques différentes. Mots clés: Protéase, caractérisation, sols riche en protéines, le gène 16SrDNA, optimisation, SDS-PAGE. ABSTRACT Producers of enzymes are researching to find cheaper alternatives using protein rich soils as a promising economic substrate, to stimulate production at lower costs and to value the byproducts from soil. Ten (10) samples of protein rich soils where the waste is subjected to natural fermentation collected in the vicinity of the town of Chlef, Algeria from soils surrounding, dairies, slaughterhouses, cattle feeding factories and decomposing organic matter rich soils, were subjected to microbiological analysis in order to determine the diversity in protease producing bacteria. The primary screening allowed the isolation of 115 bacterial strains, from which 15 were selected in the secondary screening as the most powerful isolates and were chosen to be identified initially by a phenotypic characterization, followed by genotypic characterization by PCR and the sequencing of the gene encoding 16S rDNA. The use of molecular biology tool enabled a genetic identification and phylogenetic analysis of the selected strains producing proteases. In order to increase the production of proteases in selected high performance strains, a number of parameters such as carbon and nitrogen source, temperature, pH, reaction time and inoculums concentration have been optimized. The results obtained showed that maximum production (1,60, 1,45, 1,50, 1,80, 1,65, 1,30, 1,30, 1,70, 1,50, 1,65, 1,62, 0,95, 1,55, 1,48 and 0,60 UI /ml ) respectively for the strains (T₂, T₂op, TB₂op, T₂', AH₂(-2), Xg₄, P₂(op), E₃S₃P, H₁(-6), NB₁op, Y₄, LV₂, E₃S₄p, E₃S₁IBN and P₁op) is obtained after 48 hours of incubation during inoculation of the strains on a production medium containing, 1 g/l glucose, 1g/l starch, 1g/l casein, 1% peptone and 2% of inoculum. The proteolytic activity is measured and the purity analysis is then carried out by SDS-PAGE under denaturing conditions revealing the appearance of protein bands of different molecular weights suggesting that these enzymes are homogeneous, confirming that our strains have different proteolytic activities. Key words: Protease, characterization, proteins rich soils, 16S rDNA gene, optimization, SDS- PAGE.