- [ VRPG-Doc] Biologie --- بيولوجيا

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L’application des techniques dites rapides de la biologie moléculaire à l’étude d’avortements spontanés
(2016-06-02) Mellali Sarah; Encadreur: Moulessehoul Soraya
Résumé (Français) : L’Avortement Spontané (AS), encore appelé Fausse-Couche Spontanée (FCS), désigne la perte du conceptus avant sa viabilité, c'est-à-dire avant 20 semaines de gestation ou pesant moins de 500g. Le rôle du facteur génétique dans les FCS est indéniable. En effet, les anomalies chromosomiques, principalement numériques, sont responsables de plus de 50% des FCS. Le caryotype standard était jusqu’à présent la méthode de référence pour l’étude cytogénétique des produits de FCS. Cependant, il est souvent impossible à établir en raison des échecs de culture, liés principalement à la macération des échantillons. Les techniques de Biologie Moléculaire offrent une alternative au caryotype, avec des performances qui ne cessent d’évoluer, et des approches révolutionnaires dans l’analyse cytogénétique des FCS afin de surmonter les limites du caryotype. Notre travail consistait en la description et l’évaluation de la performance d’une nouvelle technique prometteuse dite « rapide » de Biologie Moléculaire : « Prenatal BoBsTM », en comparaison avec d’autres techniques existantes sur le plan pratique actuel : FISH interphasique, MLPA et le caryotype conventionnel, dans le but de déterminer sa fiabilité et sa robustesse dans des conditions cliniques en routine, ainsi que dans l’identification des anomalies chromosomiques qui peuvent être à l’origine des pertes foetales. Dans ce sens, nous avons réalisé une analyse cytogénétique de 240 produits de FCS prélevés sur des patientes âgées entre 19 et 43 ans, avec des âges de gestations allant de la 5ème à la 41ème semaine d’aménorrhée. Cette étude s’est déroulée entre janvier 2011 et décembre 2014. Sur les 71 échantillons analysés par Prenatal BoBsTM, nous avons diagnostiqué une trisomie 21 et une déletion del 17p13.3 qui étaient passées inaperçues lors de l’analyse caryotypique. Les résultats étaient concluants dans 49 cas pour lesquels le caryotype n’a pu être réalisé en raison de l’échec des cultures cellulaires. Sur les 66 cas analysés par FISH, deux trisomies 21, une monosomie X, une trisomie 18 et deux triploïdies ont été identifiées. Les 53 cas analysé par la MLPA montraient une trisomie 21, une monosomie X et une microdélétion [XY, del 22 (q11.21)] . Prenatal BoBsTM a enregistré un taux de détection de ~ 90%, plus élevé que les autres techniques utilisées, ces dernières ayant montré un taux d’échec élevé qui se situait entre 28 et 45% ». Toutes ces approches ont un positionnement différent en terme de richesse d’informations fournies et de délais de rendu des résultats. Cependant, Prenatal BoBs™ semble être rapide, fiable, facilement applicable en routine, et constitue une bonne alternative à d’autres techniques existantes, particulièrement le caryotype dans l’analyse cytogénétique des FCS, notamment lorsque le tissu est trop macéré pour réaliser une culture cellulaire. C’est une technique prometteuse qui peut être très utile dans les régions du monde où le personnel et les laboratoires de cytogénétique sont limités.
Autogreffe de cellules souches hématopoïétiques après intensification thérapeutique chez des patients atteints de myélome multiple dans l’Ouest Algérien: Etat des lieux et facteurs pronostiques de la survie.
(2017-04-13) MOHAMMADI LATIFA; Encadreur: MOULESSEHOUL Soraya
Résumé Le myélome multiple (MM) est une hémopathie maligne caractérisée par une prolifération clonale de plasmocytes malins. La survie des patients du MM s’est significativement améliorée, depuis la mise en place des traitements intensifs suivis d’autogreffe de cellules souches hématopoïétiques (ITS-ATG). Récemment, l’A-LMR (infused Autograft Lymphocyte Monocyte Ratio) a été identifié comme un facteur pronostique dans la survie en post autogreffe dans les hémopathies malignes. Notre objectif consiste d’une part à dresser le profil clinico-épidemiologique des patients atteints de MM bénéficiant d’une ITS-ATG et d’autre part à mettre en évidence une relation entre le facteur pronostique A-LMR et la survie en post-autogreffe dans le MM. Une étude rétrospective est réalisée sur 147 patients atteints de MM bénéficiant d’une ITS ATG durant une période de 7 ans au niveau de l’EHU d’Oran. Le calcul d’A-LMR est obtenu par le nombre d’événements de lymphocytes et de monocytes acquis de 82 récoltes de cellules souches hématopoïétiques. Les résultats obtenus ont montré que l’âge moyen des patients est de 53 ans avec une prédominance masculine et un sex-ratio de 1,53. Un pic monoclonal à l’électrophorèse des protéines sériques a été noté chez 80.54% des cas dont IgG (61.04%), IgA (19.17%) et des chaînes légères (16,11%). Le myélogramme a révélé une infiltration supérieure à 10% dans 89,79% des cas. Selon la classification de Salmon et Durie, tous nos patients étaient classés au stade III. La durée moyenne de la survie globale était de trente mois (904 jours) et de 25 mois (688 jours) pour la survie sans progression (SSP). Aussi, les patients injectés avec un A-LMR≥1 ne présentent aucune différence significative de SSP avec les patients injectés avec un A-LMR<1 [médiane SSP non atteinte vs 1600 jours, à 1000-jours taux SSP de 75% contre 54%, p=0,57], aussi, la même constatation a été rapportée selon le statut de la maladie (RC vs TBRP) [médiane SSP non atteinte vs 1600 jours, à 1000-jours le taux SSP 70% vs 72%, p=0,26]. Dans l’Ouest Algérien, ce groupe de MM se présente par un polymorphisme tant sur le plan symptomatologique que biologique. Aussi, l’A-LMR ne prédit pas la survie chez les patients atteints de MM en post-autogreffe. L’amélioration des méthodes d’exploration du clone tumoral ouvre de nouvelles perspectives pour identifier de nouveaux biomarqueurs pronostiques plus performantes, afin qu’ils soient pris en compte dans les décisions thérapeutiques pour améliorer la qualité de vie des patients. Mots clefs : myélome multiple, profil clinico-épidémiologique, intensification thérapeutique, autogreffe, survie, facteur pronostique, A-LMR.
Etude épidémiologique et impact du plomb sur le risque de faible poids de naissance dans la région de Sidi Bel Abbés.
(2020-10-18) Moussaoui Faiza; Encadreur: Demmouche Abbassia
Résumé (en Français) : Introduction : La restriction de croissance fœtale qualifie du faible poids de naissance (FPN) est associée à la mortalité fœtale et néonatale, et à une morbidité à long terme ce que lui rend un problème majeur de santé publique, aussi bien dans les pays développés que dans les pays en développement. Objectif : L’objectif de cette étude était de déterminer les facteurs de risques, maternels et environnementaux associés au FPN dans l’ouest de l’Algérie wilaya de Sidi Bel Abbes. Patients et méthodes : A cet égard, une étude épidémiologique prospective sur un total de 400 femmes accouchées et une étude pratique cas-témoin consiste au dosage de la plombémie maternelle portée sur 58 parturientes ont été réalisé. Résultats : Les résultats de l’enquête épidémiologique révèlent que le poids moyen des nouveaux nés était de 3200,26±604,117 gammes avec une incidence de FPN de 16.5℅. L’analyse statistique montre qui il y a une relation significative entre le poids de naissance et le niveau d’étude (p < 0,004), la parité (p<0,000), l’âge gestationnel (p<0.000), l’intervalle intergénésique (p<0.036), les ATCD de FPN (p<0.000), la prématurité (p<0,020), les pathologies gravidiques les hémorragies (p<0.000), RPM (p<0.007), MAP (p<0.006), la fièvre (p<0.031) et l’hyperémèse (p<0.048). Par contre, l’âge et la profession maternels ne sont pas associes au FPN. Les résultats de la partie pratique rapportent un taux de plombémie maternelle moyen de 20,58±12,47µg/L. Aucune différence significative (p<0,132) n’a été noté entre les cas (18,08±6,64µg/L) et les témoins (23,07±16,12µg/L). Les résultats montrent qui n’y a pas de corrélation entre le taux de la plombémie et les différents paramètres du nouveau-né (le poids (p < 0,218), l’âge gestationnel (p<0.847), le périmètre crânien (p < 0,777) et le score d’Apgar (p < 0,187). L’utilisation quotidienne du Kohl est considérée en tant que source principale d’exposition au plomb dans notre série. Concernant l’estimation précoce du FPN, il y a une corrélation statistiquement significative entre la hauteur utérine (0,000), le Bip (0,000), la longueur fémorale (0,001) et le poids de nouveau-né. Vue les facteurs modifiables, la détermination des indicateurs du FPN mène à une réduction du ce problème via la sensibilisation des femmes à l’âge de procréer. Les mots clés : faible poids de naissance, facteurs de risque, plombémie maternelle, Sidi Bel Abbes Abstract (en Anglais) : Introduction: Restriction of fetal growth qualified as low birth weight (LBW) is associated with fetal and neonatal mortality, and with long-term morbidity, which makes it a major public health problem, in both developed and developing countries. Aim: The objective of this study was to determine maternal and environmental risk factors associated with LBW in the west of the Algeria, province of Sidi Bel Abbes. Patients and methods: In this regard, a prospective epidemiological study was carried out on a total of 400 pregnant women, and a practical case-control study consists of measuring maternal blood lead levels for 58 delivered women. Results: Since the epidemiological survey, the average weight of newborns is 3200.26 ± 604.117 g with an incidence of LBW of 16.5℅. Statistical analysis shows that there is a significant relationship between the level of education (p <0.004), parity (p <0.000), gestational age (p <0.000), the interpregnancies interval (p <0.036 ), ATCD of LBW (p <0.000) or of prematurity (p <0.020), gravid pathologies (hemorrhages (p <0.000), RPM (p <0.007), MAP (p <0.006), fever (p <0.031) and hyperemesis (p <0.048)) and birth weight. In contrast, maternal age and profession are not associated with the LBW. The results obtained through the practical part of our work report an average maternal blood lead level of 20.581 ± 12.476 ug / L with a non-significant difference (p <0.132) between the cases (18.0862 ± 6.641ug / L) and the controls (23.0759 ± 16.120ug / L). The results show that there is no correlation between the blood lead level and the different parameters of the newborn (weight (p <0.218), gestational age (p <0.847), head circumference (p < 0.777) and the Apgar score (p <0.187)). Daily use of Kohl is considered the primary source of lead exposure in our series. Regarding the early estimation of LBW, a statistically significant correlation between uterine height (0,000), Bip (0,000), femoral length (0.001) and newborn weight. In view of the modifiable factors, the determination of the indicators for the LBW leads to a reduction of this problem through the sensitization of women on reproductive age. Keywords : low birth weight, risk factors, maternal blood lead level, Sidi Bel Abbes.
Etude clinico-pathologique et immunomoléculaire du cancer du sein surexprimant HER2 dans l'Ouest Algérien
(2016-05-15) MRABENT Meriem Nesrine; Encadreur: HARIR Nouria
Résumé (Français et/ou Anglais) : Résume (Français) Dans les pays industrialisés, plus d’une femme sur dix va développer un cancer du sein et beaucoup vont décéder de leur maladie. A côté des chimiothérapies classiques, censées détruire non spécifiquement les cellules se divisant rapidement, attaquer les voies spécifiques qui initient ou maintiennent la croissance et l’invasion des cellules cancéreuses se révèle très prometteur pour traiter plus efficacement le cancer du sein. Le gène du cancer Erb2 contrôle la quantité de HER2, une protéine favorisant la croissance et exprimée à la surface des cellules du cancer du sein. L’amplification et la surexpression de HER2s’observent dans environ 20% des carcinomes du sein. La surexpression de HER2par les cancers est plus fréquemment associée à une taille tumorale plus grande, à des métastases ganglionnaires, à un plus mauvais pronostic et elle diminue la survie globale. Les cancers HER2positifs peuvent être traités avec une très grande efficacité grâce à une thérapie ciblée, le trastuzumab. La combinaison du trastuzumab et d’une chimiothérapiediminue considérablement les récidives, réduit significativement la mortalitédue au cancer du sein. Cependant, malgré les avantages cliniques de ces thérapies ciblées anti HER2, près de 50% des patientes atteintes de cancers du sein HER2 amplifié ne parviennent pas à répondre au trastuzumab tout en subissant les mêmes risques d’effets secondaires, et la grande majorité des patientes qui répondent au trastuzumab développent une résistance après 2 ans de traitement.L’activation du gène STAT3 est parmi les altérations moléculaires associées à cette résistance. Son activation est fréquemment rapportée dans prés de 60% des tumeurs du sein. STAT3 a été classé comme un oncogène en raison de sa capacité à moduler des transformations oncogéniques. Cependant, la cause exacte de l'activation persistante de STAT3 dans divers cancers et comment cette activation persistante contribue à la progression tumorale est mal comprise. Dans ce contexte, nous avons étudié la fréquence de l’oncoprotéine HER2 et sa corrélation avec les paramètres de mauvais pronostic, dans une population féminine provenant de l’Ouest Algérien, durant une période de cinq ans. Nous avons également évalué l’expression des protéines STAT3 ainsi que leurs états d’activation PSTAT3 (Tyr705) par immunohistochimie dans des tumeurs HER2+, et leurs corrélations avec les paramètres clinico-pathologiques. Au cours de notre période d’étude (5 ans), un total de 628 cas de carcinomes infiltrants a été enregistré, avec un âge moyen de 51.06 ans, (18.3%) des patientes avaient moins de 40ans. La tranche d’âge la plus touché par le cancer du sein était (41-60 ans). Le carcinome canalaire infiltrant était retrouvé dans (85%) des cas. HER2 était observé dans (26.8%) des cas et dans (28.6%) de la jeune population étudiée (≤40 ans). Notre étude a confirmé qu’effectivement le statut HER2+ corrélait significativement avec les paramètres de mauvais pronostic a l’instar de taille tumorale, le grade tumoral et l’infiltration ganglionnaire dans les cas étudiés tout âge confondu. L'analyse immunohistochimique a révélé une surexpression cytoplasmique de STAT3 dans (46.7%) et une surexpression nucléaire de PSTAT3 (Tyr705) dans (16.7%) des tumeurs HER2+ étudiées. Nos résultats ont révélé une corrélation positive significative entre la surexpression de Stat3 et la taille tumorale (r=0.081 ; p=0.014) ainsi qu’avec le statut hormonal ER/PR+ (r=0.318 ; p=0.028), par ailleurs une corrélation négative significative était retrouvée entre la surexpression de PStat3 et le type histologique (r= -0.188 ; p=0.001), également avec la taille tumorale (r= -0.098 ; p=0.048) et avec le statut hormonal (r= -0,102 ; p=0.020). Nos résultats expérimentaux nous ont mené a conclure que le statut HER2 joue un rôle pronostique important; ceci est directement lié aux paramètres agressifs. La régulation de l’activité transcriptionnelle et signalisatrise de STAT3 est un élément très important dans le développement tumoral et dans la réponse au traitement. Ainsi, la connaissance de ces co-facteurs et la compréhension des différents mécanismes de régulation des fonctions de STAT3 suscitent un grand intérêt. Mots Clés : Cancer du sein, HER2, STAT3, paramètres clinico-pathologiques. Abstract In industrialized countries, more than one tenth women would develop breast cancer and numerous would die of this disease. In addition to traditional chemotherapies made specifically to destroy the prompt dividing cells and to attack the specific pathways that initiate or maintain the growth and invasion of cancer cells which seems very promising for more effective breast cancer treatment. HER2/neu cancer gene controls the amount of HER2 which is a growth factor protein expressed on the surface of breast cancer cells. Amplification and overexpression of HER2 is observed in approximately 20% of breast carcinomas. HER2 overexpression in cancer is more often associated with larger tumor size, lymph node metastasis, to a worse prognosis and decreased overall survival. HER2 positive cancers can be treated with very high efficiency through targeted therapy, trastuzumab. The combination of trastuzumab and chemotherapy significantly reduces recurrence, as it reduces significantly mortality caused by breast cancer. Despite the clinical benefits of these anti HER2 targeted therapies, about 50% of patients with amplified breast cancers HER2 don’t respond to trastuzumab while undergoing the same risks of side effects, the majority of patients who respond to trastuzumab develop resistance after 2 years of treatment. Activation of STAT3 gene is among the molecular alterations associated to this resistance. Its activation is often reported in nearly 60% of breast tumors. STAT3 has been classified as an oncogene because of its ability to modulate oncogenic transformation. However, the exact cause of its persistent activation in various cancers and how this activation contributes to tumor progression is poorly understood. In this context, we studied the frequency of HER2 oncoprotein and its correlation with the poor prognostic parameters in Western Algerian female population, along a period of five years. We also assessed the expression of STAT3 protein and the activation of PSTAT3 (Tyr705) using immunohistochemistry in HER2 + tumors, as well as their correlations with clinical pathological parameters. During our study period (5 years), a total of 628 cases of invasive carcinomas were recorded, with an average age of 51.06 years; 18.3% patients were aged below 40 years. The most affected age group was (41-60 years). Infiltrating ductal carcinoma was found in (85%) of cases. HER2 was observed in 26.8% cases and in 28.6% of the young studied population (≤40 years). Our survey confirmed that HER2+ status was significantly correlated with poor prognostic parameters like tumor size, tumor grade and lymph node infiltration in the studied cases belonging to all ages. The Immunohistochemical analysis revealed a cytoplasmic overexpression of STAT3 in 46.7% and a nuclear overexpression of PSTAT3 (Tyr705) in 16.7% of HER2 + selected tumors. Our results revealed a significant positive correlation between the overexpression of Stat3 and tumor size (r = 0.081; p = 0.014) as well as hormonal status ER / PR + (r = 0.318; p = 0.028), further a significant negative correlation was found between PStat3 overexpression and histological type (r = -0 188; p = 0.001), with tumor size (r = -0 098; p = 0.048) and also with hormone status (r = -0.102; p = 0.020). Our experimental results led us to conclude that HER2 status has an important prognostic role which is directly linked to aggressive settings. The regulation of the transcriptional signaling activity of STAT3 and is very important in tumor development and treatment response. Thus, the knowledge of these co-factors as well as the understanding different regulatory mechanisms of STAT3 functions could be of a great interest. Keywords: Breast Cancer, HER2, STAT3, clinical-pathological parameters.
Troubles Gustatifs et Anomalie d’Expression de l’Interleukine-6 et de la Leptine Chez l’Homme Obèse
(2017-03-15) REMLA NESRINE; Encadreur: ARIBI Mourad
Résumé (Français et/ou Anglais) : Introduction.L’accumulation anormale ou excessive de graisse corporelle renconctrée au cours de l’obésité représente un risque pour la santé. Autrefois considéré comme un problème propre aux pays à revenu élevé, l’obésité augmente désormais de façon spectaculaire dans les pays à faible ou moyen revenu, surtout en milieu urbain.Des évidences s’accumulent de plus en plus sur l'implication des médiateurs inflammatoires tels que l’interleukine-6 et la leptine dans le développement de l’obésité, d’autres part la sensibilité des récepteurs gustatifs au gras est une piste importante dans la compréhension de la maladie. Objectif.La relation entre les taux d’IL-6 et de leptine circulants en association avec l’altération du goût ont été évalués chez des jeunes patients obèses. Matériels et méthodes.trente patients obèses et trente témoins sains appariés selon le sexe et l’âge ont été recrutés pour une étude cas-témoins, menée au niveau du laboratoire de Biologie Moléculaire Appliquée et d’Immunologie. Résultats. Les niveaux circulants de l’IL-6 et de la leptine, ainsi que le complément C3 sont significativement plus élevés chez les obèses par rapport aux témoins de poids normal (p= 0.000, p > 0.01, respectivement). En outre, les taux de la catalase et les niveaux de l’ORAC ont été significativement bas chez les patients par rapport aux témoins (p = 0.000). Par ailleurs, les taux sériques d’albumine étaient diminués chez les patients obèses par rapport aux témoins, mais la différence n'a pas atteint le seul de signification statistique (p > 0.01). Les témoins présentaient une sensibilité orale élevée quant à la détection de l’acide linoléique (faible seuil de détection), tandis que les participants obèses avaient des scores élevés de la détection des graisses (𝑝< 0.001). En outre, l'interleukine-6 et la leptine ont été fortement associées à altération de la réponse gustative. Enfin, l’estimation globale de OR commun et son intervalle de confiance obtenue par la méthode Mantel-Haenzel conclut que l’IL-6 et la leptine sont fortement associés à l'obésité, chez les patients ayant soit un GRS 4 ou GRS> 4 (resp., Mantel-Haenszel commun OR = 8,77 [IC à 95%, 2.06- 37.44; 𝑝 = 0,003]; Mantel-Haenszel commun OR = 5,76 [IC 95%, 1,64 à 20,24; 𝑝 = 0,006]). Conclusion. L’obésité est considérée comme un état inflammatoire dans lequel l’altération du goût est associée à des taux élevés d’IL-6 et de leptine. Mots clés. Obésité, altération du goût, Interleukine-6, leptine.